Sinossi:
Il protagonista del nuovo gioco è un nobile fiorentino antenato di Desmond Miles e discendente di Altair, di nome Ezio Auditore. L'avventura inizierà nell'anno 1486 che corrisponderà all'epoca del rinascimento e oltre ad essere dotato di due lame, il "nuovo Altair" non si è sottoposto al rito del taglio delle dita per permettere la fuoriuscita delle lame dai pugni, quindi le userà in maniera diversa da quanto visto nel primo gioco. Nel corso dell'avventura è possibile vedere alcune delle location che ospiteranno questo nuovo episodio e sono: la Basilica di San Marco, il Canal Grande e il Ponte di Rialto, ma potremo visitare anche alcuni luoghi della campagna Toscana. Ezio Auditore potrà spostare nei seguenti luoghi o a piedi o a cavallo, mentre a Venezia avrà la possibilità di nuotare nei canali e restare immerso finchè¨ il suo fiato glielo permetterà . Ci saranno nuovi metodi di gameplay che il protagonista potrà utilizzare come ad esempio uccidere un nemico silenziosamente (se, per esempio, un soldato vedrà qualcosa muoversi dentro un covone di fieno e si avvicinerà , Ezio potrà ucciderlo silenziosamente con una lama e mettere il cadavere dentro il covone in modo che non venga trovato) e potrà avere nuovi armi a disposizione tra cui un'ascia, una mazza, un martello, una lancia, un paio di spade e due diversi tipi di piccole lame, tutte dotate di caratteristiche diverse.